Em protocolos de seqüenciamento de DNA a introdução de 7-deaza-citidina é necessária sempre que a seqüência a ser determinada:

Trabalhando com o isolamento de um gene de trigo, um pesquisador desenvolveu duas estratégias de clonagem, utilizando como sonda um gene homólogo isolado de plantas de arroz. Na primeira delas, ele utilizou como material inicial o DNA extraído de culturas de células em suspensão de trigo, resultando na obtenção do clone A. Numa segunda abordagem, ele utilizou uma preparação de RNA mensageiro das mesmas células, resultando na obtenção do clone B.

Os clones obtidos serão utilizados para a realização de três experimentos:

Experimento 1 – caracterização dos elementos que regulam a expressão tecidual do gene.

Experimento 2 – expressão do gene em bactérias para purificação da proteína codificada pelo gene isolado.

Experimento 3 – isolamento de genes de proteínas que interagem com a proteína codificada pelo gene isolado através do sistema Duplo Híbrido em leveduras.

Os clones que serão utilizados, respectivamente, para cada um dos experimentos são:

A transformação genética de plantas efetuada pela bactéria de solo Agrobacterium tumefaciens é uma das técnicas mais utilizadas para a transferência de genes para o genoma vegetal. Além de sua utilização para aintrodução de genes de interesse agronômico, esta técnica também pode ser utilizada como uma estratégia para o isolamento e clonagem de genes vegetais, tais como a clonagem através de:

O sistema Duplo Híbrido (Two-hybrid system) é uma técnica para a identificação e isolamento de genes que vem sendo largamente utilizada para a identificação de novos genes e redes regulatórias. O desenvolvimento desta técnica se encontra baseado na:

Os vetores de clonagem que devem ser utilizados, respectivamente, para as seguintes clonagens são:

Situação 1 – Clonagem de um fragmento genômico de 200Kb

Situação 2 – Clonagem de um cDNA de 1Kb

Situação 3 – Clonagem para introdução de um gene no genoma de uma planta

São características essenciais de um vetor de clonagem a presença de:

São rotineiramente utilizadas como técnicas de purificação de macromoléculas empregadas nos protocolos de purificação em larga escala de ácidos nucleicos vegetais: