Em laboratório, a atividade enzimática é determinada principalmente pela massa molecular da enzima, sendo pouco influenciada por variações de temperatura e pelo pH do meio.

O tipo de pipeta utilizada (manual ou automática) e o volume de ar no laboratório são os únicos parâmetros que definem a velocidade máxima (V_max) de uma reação, independentemente da estrutura da enzima.

A velocidade das reações enzimáticas é influenciada diretamente pela temperatura do meio, pelo potencial hidrogeniônico (pH) e pela concentração de substrato disponível para a formação do complexo enzima-substrato.

A presença de água em estado sólido é o único fator que permite a catálise, uma vez que enzimas perdem sua função biológica e sofrem desnaturação imediata em ambientes aquosos líquidos.

A concentração de enzima é um fator irrelevante para a cinética química, sendo a atividade catalítica afetada apenas pela incidência de luz ultravioleta sobre os cofatores inorgânicos.