Grande parte dos pacientes apresentam positividade por toda a vida, após tratamento adequado, razão pela qual os testes treponêmicos não são indicados para acompanhamento da doença.

Os testes não treponêmicos detectam anticorpos anticardiolipina, não específicos para T. pallidum, sendo que o teste de aglutinação denominado TPHA é um dos mais utilizados.

O chamado efeito ou fenômeno prozona pode levar a resultados falso-positivos ou falso-reagentes nos testes quantitativos treponêmicos, exigindo a realização dos ensaios com amostra pura e diluída 1:2.

Ensaios com as metodologias de ELISA e quimioluminescência são classificados como testes não treponêmicos em virtude de utilizar antígenos sintéticos ou recombinantes.

A microscopia em campo escuro a partir de exsudato seroso de lesões primárias e secundárias, método direto de pesquisa, possui baixa sensibilidade e especificidade, sendo preferível a observação com material corado.