No método enzimático o glicerol 3-fosfato produzido na reação catalisada pelo glicerol quinase forma um composto colorido – o formazan – inversamente proporcional ao teor de triglicerídeos.

Os métodos enzimáticos para a quantificação dos triglicerídeos inicialmente necessitam a hidrólise dos ácidos graxos do glicerol realizada pela enzima lipase geralmente acompanhada por uma protease.

Um fator importante que afeta a exatidão da medida dos triglicerídeos é a presença de glicerol livre endógeno no soro.

Nas determinações baseadas nas reações químicas, inicialmente os triglicerídeos são extraídos com a remoção de substâncias interferentes, tais como, os fosfolipídios e a glicose.