não haverá interferência pois independente da ordem de adição do reagente haverá reação entre o conjugado e o substrato.

ocorrerá resultados falso positivos pois o anticorpo do substrato adicionado antes do conjugado irá se ligar aos anticorpos inespecíficos presente na amostra.

ocorrerá resultados falso negativos pois os anticorpos anti-HCV presente na amostra serão inativados pelo anticorpo do substrato adicionado antes do conjugado.

ocorrerá resultados falso positivos pois o conjugado adicionado como último reagente irá se ligar à enzima do substrato e portanto irá alterar a densidade óptica de todos os poços.

ocorrerá resultados falso negativos pois os anticorpos anti-HCV presentes na amostra devem se ligar primeiramente ao anticorpo do conjugado para então serem revelados pela ação do substrato.