Um(a) pesquisador(a) está realizando um experimento de clonagem de um gene específico em um plasmídeo vetor. Após a digestão do DNA genômico e do vetor com as mesmas enzimas de restrição, o(a) pesquisador(a) realiza a reação de ligação e transforma células competentes com o produto. No entanto, após a cultura, não são encontradas colônias contendo o inserto desejado. Considerando que o objetivo é identificar a causa mais provável para a ausência de colônias com o inserto, qual das seguintes situações pode ser a causa principal?