A pesquisa a fresco de tripanossomatídeos possuem maior sensibilidade, são recomendados principalmente quando a pesquisa a fresco for negativa. Dentre os métodos diretos, são indicados quando o paciente estiver com sintomas há mais de 30 (trinta) dias;

Os métodos de concentração (Strout, microhematócrito ou creme leucocitário) possuem menor sensibilidade que os outros métodos, é realizado prioritariamente na região da Amazônia Legal, em virtude da sua utilização para diagnóstico da Malária.

A lâmina corada de gota espessa ou esfregaço é utilizada como primeira alternativa por ser de execução rápida e simples, sendo mais sensível que o esfregaço corado. A situação ideal é a realização da coleta com paciente febril e dentro de 30 dias do início de sintomas;

Quando os resultados forem negativos na primeira coleta devem ser realizadas novas coletas até a confirmação do caso e/ou desaparecimento dos sintomas agudos, ou confirmação de outra hipótese diagnóstica.