Recomenda-se que o período ideal de coleta da primeira amostra esteja compreendido entre o 3º e o 5º dia de vida do bebê devido às especificidades das doenças diagnosticadas atualmente.

Para realizar a punção, não deve ser realizada a assepsia do local, visto que o álcool pode alterar o resultado da testagem.

Deve ser considerada como uma condição de exceção toda coleta realizada após o 28º dia de vida (devem ser avaliadas pelo serviço médico, para orientação e investigação diagnóstica específica, se necessário).

O aquecimento prévio do pé do bebê antes da coleta deve ser considerado, pois leva à vasodilatação e, consequentemente, a um aumento do fluxo sanguíneo, que favorece a boa coleta.

O Programa Nacional de Triagem Neonatal tem em seu escopo seis doenças: fenilcetonúria, hipotireoidismo congênito, doenças falciformes, fibrose cística, hiperplasia adrenal congênita e deficiência de biotinidase.