A prova direta consiste em pôr em contato soros-teste conhecidos, anti-A, anti-B e anti-AB, com glóbulos vermelhos a serem testados.

A prova reversa consiste em colocar em contato o soro a testar com, pelo menos, glóbulos vermelhos conhecidos A1 e B, permitindo reconhecer a presença ou não de anticorpos dirigidos contra esses antígenos.

A determinação do fator Rh depende de um antígeno nas hemácias, diferente dos antígenos A e B, do sistema ABO.

Na determinação do fator Rh, usa-se o soro anti-AB.

O termo Rh positivo e Rh negativo refere-se à presença (Rh positivo) ou ausência (Rh negativo), na membrana da hemácia, do antígeno D.