Os organismos que adquirem a coloração vermelha são chamadas de gram-negativas.

Organismos gram-negativos retêm o complexo cristal violeta-lugol e assim apresentam a cor roxo-escura.

Os corantes mais utilizados são a solução de carbolfucsina e corante azul de metileno.

A última etapa da coloração é cobrir a superfície da lâmina com a solução de azul de metileno.

Para descorar o esfregaço utiliza-se uma solução de álcool – ácido a 3% ou mais.