Normalmente diferentes tipos de micro-organismos são testados em uma mesma placa do teste de sensibilidade.

Evita-se o uso do meio de cultura Mueller-Hinton, pois este apresenta baixa reprodutibilidade e não permite crescimento satisfatório dos patógenos não fastidiosos.

Após o isolamento bacteriano, a partir do crescimento puro do caldo inocula-se uma placa com meio de cultura sólido, na qual se adicionam discos de papel de filtro com concentração fixa de antibióticos.

A medida do halo de crescimento é analisada conforme tabela de interpretação, e o resultado da susceptibilidade da bactéria é convertido para “sensível” ou “resistente”.

Os testes de disco-difusão baseados apenas na presença ou ausência de um halo de inibição, sem consideração do tamanho do halo, são aceitáveis.