Sobre a técnica de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), utilizada para a detecção de antígenos ou anticorpos, analise as afirmativas abaixo:

I. A escolha do substrato cromogênico no ELISA é irrelevante para a sensibilidade do ensaio, sendo a etapa de incubação o único fator crítico para a detecção do sinal.
II. No ELISA indireto, o uso de um anticorpo secundário conjugado com enzima aumenta a sensibilidade do ensaio em relação ao ELISA direto.
III. O método de lavagem entre etapas no ELISA tem impacto significativo nos resultados, podendo causar falsos positivos se não for rigorosamente seguido.
IV. A leitura do resultado é realizada em um espectrofotômetro, que mede a densidade óptica do produto formado pela reação enzimática.
V. O ELISA competitivo é mais sensível para a detecção de analitos em baixa concentração, comparado aos métodos direto e indireto.

Assinale a alternativa correta: