Em genomas de mamíferos, a técnica CRISPR-Cas9 pode clivar não apenas as sequências de DNA alvo, mas também sequências altamente homólogas ou idênticas, resultando em mutações fora de alvo (off-target mutations). Essas mutações indesejadas podem ser deletérias, levando a efeitos adversos como morte celular ou transformação e comprometendo a eficiência da inserção do gene desejado. Para garantir a especificidade da CRISPR-Cas9 e minimizar essas mutações fora de alvo, é crucial selecionar locais de destino com alta compatibilidade entre o RNA guia (gRNA) e sua sequência complementar, bem como otimizar a dosagem da CRISPR-Cas9. A técnica CRISPR-Cas9 está sendo usada para inserir um gene de interesse no genoma de células de mamíferos, mas a inserção é ineficiente. Qual das seguintes estratégias é mais apropriada para aumentar a eficiência da inserção do gene?