Em um experimento de clonagem, um(a) cientista utiliza um vetor contendo um gene de resistência a antibiótico e um sítio de clonagem múltiplo (MCS). Após transformar as bactérias com o vetor recombinante, o cientista plaqueia as células em um meio contendo o antibiótico apropriado. Muitas colônias crescem, mas poucas contêm o inserto desejado. Assinale a alternativa que apresenta a possível causa para a baixa taxa de obtenção de colônias com o inserto.

Um(a) pesquisador(a) está realizando um experimento de clonagem de um gene específico em um plasmídeo vetor. Após a digestão do DNA genômico e do vetor com as mesmas enzimas de restrição, o(a) pesquisador(a) realiza a reação de ligação e transforma células competentes com o produto. No entanto, após a cultura, não são encontradas colônias contendo o inserto desejado. Considerando que o objetivo é identificar a causa mais provável para a ausência de colônias com o inserto, qual das seguintes situações pode ser a causa principal?

Um grupo de cientistas está utilizando um sistema de repórter gênico para avaliar a expressão de um promotor específico em células de mamíferos. Após a transfecção das células com o plasmídeo repórter, eles observam baixa atividade luminescente. O fator que mais provavelmente contribui para essa baixa atividade é:

A expressão gênica entre diferentes tecidos de um organismo foi comparada, utilizando RNA-Seq para essa tarefa. Foi observada uma grande quantidade de dados de expressão diferencial. A etapa mais corretamente crucial para garantir a qualidade dos dados de RNA-Seq é:

Uma empresa de biotecnologia está desenvolvendo um novo kit de qRT-PCR para quantificação da expressão de genes em plantas e quer assegurar que o kit funcione com eficiência em várias espécies vegetais. Foi observado que a eficiência do kit varia entre espécies. Qual das seguintes abordagens é a mais apropriada para resolver especificamente esse problema?

Em um estudo de expressão gênica utilizando microarrays, um(a) pesquisador(a) encontrou um grande número de genes diferencialmente expressos após o tratamento com um agente químico. Para garantir a precisão dos resultados, qual das seguintes práticas é mais recomendada para validar os dados obtidos?

A expressão gênica de células tratadas com um novo fármaco foi avaliada utilizando-se qRT-PCR, para quantificar os níveis de mRN. No entanto, após a análise, observou- se que os níveis de expressão do gene de referência utilizado (GAPDH) variaram significativamente entre os diferentes tratamentos. A melhor abordagem para corrigir essa variação é:

Em um experimento de cultura celular, observa-se que as células começam a morrer após alguns dias de cultivo, apesar de todas as condições parecerem corretas. Investigando, descobre-se que houve um problema com a água utilizada para preparar o meio de cultura.

Assinale a alternativa que apresenta corretamente a provável causa da morte celular.

A eficiência de transfecção de células de mamíferos depende de vários fatores, incluindo a densidade celular no momento da transfecção. Se as células estiverem muito dispersas ou superconfluentes, a eficiência de transfecção tende a diminuir. Células muito dispersas podem não internalizar o DNA eficientemente, enquanto células superconfluentes podem ter reduzido seu ritmo de divisão, o que também prejudica a eficiência da transfecção. Um(a) pesquisador(a) está realizando a transfecção de células de mamíferos com um plasmídeo novo e observando baixa eficiência de transfecção. Após revisar o protocolo, decide realizar uma modificação crucial para aumentar essa eficiência. Assinale a alternativa que corresponde corretamente a essa modificação.

Em cultivos celulares eucarióticos, a composição do meio de cultura é crucial para manter a proliferação e a saúde das células. As presenças de certos componentes, como aminoácidos, tampões e fatores de crescimento, desempenham papéis importantes na manutenção da homeostase celular e na capacidade das células de se dividir e proliferar. Estudos mostram que a alteração ou ausência de alguns desses componentes pode levar a estresse celular e comprometimento do crescimento. Uma linhagem celular eucariótica, que exige suplementação de fatores específicos no meio de cultura para proliferação adequada, foi cultivada. Após uma mudança no fornecedor dos suplementos, as células começaram a mostrar sinais de estresse e redução na taxa de divisão celular. A ausência de qual dos seguintes componentes causou esse problema?