Assinale as afirmações abaixo, sobre a tipagem HLA de alta resolução por SBT (Sequence-Based Typing), com V (verdadeiro) ou F (falso).

( ) O método de Sanger para SBT, por ser uma técnica de tipagem HLA por sequenciamento, tem a vantagem de não apresentar resultados com ambiguidades, que ocorrem com certa frequência nas técnicas de baixa e média resolução.

( ) O sequenciamento dos locos HLA realizado por SBT apresenta o resultado em alta resolução com quatro dígitos, o que significa que a tipagem é feita em nível alélico.

( ) A tipagem de alta resolução por SBT é capaz de distinguir os alelos baseando-se na sequência da região de ligação do peptídeo na molécula HLA, o que é fundamental para transplantes de célulastronco hematopoiéticas.

( ) A tipagem HLA de alta resolução por SBT ainda é considerada padrão-ouro, mas já apresenta desvantagens quando comparada à técnica de Sequenciamento de Nova Geração (NGS), que tem um rendimento muito maior e fornece resultados de seis dígitos em poucas horas, com menor tempo de execução do que o SBT.

A sequência correta de preenchimento dos parênteses, de cima para baixo, é

Considere as seguintes afirmações sobre o Sequenciamento de Nova Geração (NGS) para a tipagem HLA em alta resolução.

I - Baseia-se na monitoração da emissão de fluorescência, com a utilização de primers marcados com diferentes fluoróforos na PCR inicial, que antecede a reação de sequenciamento.

II - Pode ser realizada pela detecção da variação de pH que ocorre na reação de sequenciamento quando um íon hidrogênio é liberado, após a incorporação de um nucleotídeo.

III - Permite que diferentes locos e múltiplas amostras, marcadas individualmente com barcodes, sejam processados em um único tubo de reação de sequenciamento.

Quais estão corretas?

Considere as seguintes afirmações sobre identificação humana em Genética Forense, assinalando-as com V (verdadeiro) ou F (falso).

( ) A identificação de uma vítima do sexo feminino, quando não for possível na necropsia, poderá ser feita através do estudo comparativo do perfil genético do cromossomo X entre a vítima e seu suposto pai, pois todos os alelos do cromossomo X do pai deverão estar presentes no DNA da filha.

( ) Os STRs (Short Tandem Repeats) ou microssatélites de escolha, para fins de identificação humana, são os que apresentam baixa frequência de mutações, menor heterozigose e maior polimorfismo.

( ) Em casos de investigação de paternidade, o índice e a probabilidade cumulativa de paternidade só são calculados nos casos em que o resultado for de inclusão do suposto pai e não quando for uma exclusão de paternidade.

( ) Os laboratórios, na maioria das vezes, concluem pela exclusão da paternidade quando, analisando-se um número suficiente de locos de STRs (geralmente em torno de vinte), o alelo paterno do filho não for encontrado no perfil do DNA do suposto pai em um dos locos analisados.

A sequência correta de preenchimento dos parênteses, de cima para baixo, é

No transplante _________ de células-tronco hematopoiéticas, é comum o paciente apresentar quimerismo ________, quando não se encontra em condicionamento mieloablativo. Por isso, para melhor orientar as condutas terapêuticas, a monitoração do quimerismo deve ser realizada ____________.

Assinale a alternativa que completa, correta e respectivamente, as lacunas do texto acima.

O método mais utilizado atualmente para a realização do exame de quimerismo, importante no transplante de células-tronco hematopoiéticas, é

A base de dados IMGT/HLA fornece um recurso centralizado para todos os interessados clinicamente ou cientificamente no Sistema HLA. Considere as afirmações abaixo sobre o IMGT/HLA.

I - O banco de dados IMGT/HLA é um repositório para as sequências alélicas e genes do sistema HLA.

II - A nomenclatura desses genes e alelos, bem como seu controle de qualidade, é de responsabilidade do Comitê de Nomenclatura para os fatores do Sistema HLA da OMS.

III - O banco de dados do IMGT/HLA é atualizado semestralmente.

Quais estão corretas?

Sobre a tipagem HLA por PCR-SSO reverso, por Luminex, assinale a afirmação correta.

Considere a genotipagem HLA por PCR-SSO, empregando a plataforma Luminex. Qual das alternativas abaixo NÃO está de acordo com essa tecnologia?

Assinale as afirmações abaixo, sobre técnicas de biologia molecular utilizadas para tipagem HLA, com V (verdadeiro) ou F (falso).

( ) A maioria dos métodos de sequenciamento (PCRSBT ou NGS) começam com uma etapa de PCR para aumentar a quantidade de DNA disponível para a reação posterior de sequenciamento.

( ) Na tipagem HLA por PCR-SSO (oligonucleotídeo sequência específica) reverso, o produto amplificado é adicionado a uma matriz sólida à qual as sondas (oligonucleotídeos) estão ligadas.

( ) Para verificar a inibição ou ausência de amplificação de uma reação de PCR-SSP, um controle interno polimórfico é adicionado a cada poço de reação.

( ) Uma das limitações da metodologia PCR-SSO reverso acontece quando o polimorfismo de determinado alelo encontra-se fora da região dos éxons amplificados, o que inviabiliza a identificação do alelo na amostra.

A sequência correta de preenchimento dos parênteses, de cima para baixo, é

Considere uma avaliação pré-transplante, na qual a prova cruzada por citometria de fluxo foi positiva e a prova cruzada virtual foi negativa. Qual dos eventos apresentados nas alternativas abaixo pode explicar essa discordância?