O Ensaio Imunoenzimático ELISA é uma técnica analítica sensível com base na reação antígeno-anticorpo, amplamente utilizada na pesquisa e no diagnóstico clínico. Sobre os princípios e as metodologias das diferentes variações do ELISA, analise as assertivas a seguir:

I. O método ELISA indireto é empregado majoritariamente para a detecção e a quantificação de antígenos em uma amostra biológica.

II. As etapas de lavagem, geralmente utilizando soluções tampão com detergentes, têm como objetivo principal remover moléculas não ligadas, evitando reações inespecíficas.

III. No ELISA indireto, o anticorpo secundário, o qual está conjugado à uma enzima, liga-se diretamente ao antígeno imobilizado na placa para, após a adição do substrato, promover a alteração de coloração.

IV. Após a reação da enzima conjugada com o seu substrato cromogênico, o produto da reação formado é quantificado por meio da leitura de absorbância.

V. No ELISA direto, o poço da microplaca é previamente sensibilizado com um anticorpo de captura fixado à sua superfície.

Quais estão corretas?