Em genomas de mamíferos, a técnica CRISPR-Cas9 pode clivar não apenas as sequências de DNA alvo, mas também sequências altamente homólogas ou idênticas, resultando em mutações fora de alvo (off-target mutations). Essas mutações indesejadas podem ser deletérias, levando a efeitos adversos como morte celular ou transformação e comprometendo a eficiência da inserção do gene desejado. Para garantir a especificidade da CRISPR-Cas9 e minimizar essas mutações fora de alvo, é crucial selecionar locais de destino com alta compatibilidade entre o RNA guia (gRNA) e sua sequência complementar, bem como otimizar a dosagem da CRISPR-Cas9. A técnica CRISPR-Cas9 está sendo usada para inserir um gene de interesse no genoma de células de mamíferos, mas a inserção é ineficiente. Qual das seguintes estratégias é mais apropriada para aumentar a eficiência da inserção do gene?

Um grupo de pesquisa pretende corrigir uma mutação pontual em células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) usando CRISPR-Cas9, mas enfrenta uma baixa taxa de correção. Qual estratégia correta deve adotar para aumentar a eficiência de correção da mutação?

A tecnologia TALEN (Transcription Activator-Like Effector Nucleases) é utilizada para edição de genomas que são extremamente precisos, podendo modificar quaisquer sequências de DNA em organelas celulares (mitocôndrias, por exemplo); e discriminar entre alvos de DNA metilados e não metilados. Em plantas, os TALENs podem ser usados para as proteger dos efeitos das alterações climáticas, através da edição de genes que aumentam a proteção contra pragas, doenças, condições ambientais severas e melhoria da qualidade dos produtos agrícolas. Num experimento, TALEN foi utilizada para editar um gene específico em células de planta, mas a edição não ocorreu conforme o esperado. Qual das seguintes estratégias aumentará a eficiência da edição gênica?

A eficiência e a precisão da edição gênica utilizando CRISPR-Cas9 vêm sendo estudadas por diversos autores, podendo ser influenciadas por vários fatores. Grupos de pesquisa demonstraram que a incorporação de um nucleotídeo de substituição ou a inserção de um fragmento específico pode levar a uma eficiência significativamente aumentada, enquanto outras estratégias podem não atingir o mesmo nível de eficácia. Considerando essas informações, qual das seguintes abordagens é a mais adequada para aumentar a eficiência e a precisão da edição gênica utilizando CRISPR-Cas9?

Um grupo de pesquisa está tentando editar o gene BRCA1 em células humanas, usando a tecnologia CRISPR-Cas9. Após a edição, observa que algumas células apresentam deleções ou inserções inesperadas, embora a maioria das células tenha a mutação desejada.

A causa mais provável desses resultados é:

Um grupo de pesquisadores está desenvolvendo um vetor de expressão para a produção de uma enzima em células de levedura, e eles observam que a enzima recombinante é expressa, mas em níveis subótimos. Qual abordagem eles devem adotar para otimizar a expressão da enzima?

Estudos da expressão de proteínas têm demonstrado que a escolha de um promotor ineficiente para o experimento limita a capacidade das células de expressar o produto desejado, mesmo que outras condições experimentais estejam otimizadas. Durante a construção de um vetor de expressão, um(a) cientista decide incluir um tag de epítopo na extremidade C-terminal da proteína recombinante, para facilitar a purificação e a detecção. Após a transfecção e a expressão do gene, verifica que a proteína recombinante está presente em níveis muito baixos. A causa desse problema é:

A cultura de células de inseto tem ganhado destaque como hospedeiro eucariótico para expressão de produtos gênicos recombinantes, devido a suas várias vantagens em relação aos sistemas baseados em células de mamíferos. As células de inseto dispensam a necessidade de incubação com CO₂ e a adição de soro fetal bovino ao meio de cultura, além de eliminarem o risco de contaminação humana. Para otimizar a expressão de produtos recombinantes, a escolha do sistema de expressão é crucial. O sistema vetor de expressão baculovírus, que utiliza linhagem celular selvagem e baculovírus recombinante, é uma opção eficiente. Nesse sistema, o gene de interesse é inserido no DNA viral, permitindo que as células de inseto infectadas repliquem o vírus e expressem a proteína codificada, sem integração do gene ao DNA celular.

Para esse tipo de sistema, qual linhagem celular é diretamente utilizada?

A atividade transcricional de um promotor específico em células de mamífero foi investigada. Para tanto, clonou- se um gene repórter em um vetor de expressão e realizou-se a transfecção nas células. Observou-se que a expressão do gene repórter foi muito baixa. Sabendo que elementos amplificadores são conhecidos por aumentar significativamente a transcrição de genes ao interagirem com promotores e melhorarem a eficiência da transcrição, qual procedimento resolve esse problema?

Uma proteína recombinante em células de mamífero está sendo construída utilizando-se um vetor de expressão. Foram escolhidos um promotor forte e um sinal de poliadenilação adequado. No entanto, após a transfecção, o pesquisador observa que a proteína recombinante não está sendo expressa. Assinale a alternativa que corretamente explica o motivo dessa falha na expressão.