A reação imuno-histoquímica não pode ser automatizada.

Sem considerar erros de pipetagem, a recomendação do fabricante para concentração de trabalho inicial de um anticorpo primário é 1:25, e, nesse caso, supondo-se que se tenha 50 lâminas, com corte tecidual médio, é preciso utilizar 2400 microlitros do diluente e 100 microlitros do anticorpo primário concentrado, ou seja, 2500 microlitros de volume final.

O bloqueio dos sítios inespecíficos é uma etapa importante e deve ser realizada antes da incubação do anticorpo primário.

O formaldeído a 10% não tamponado é preferível ao formaldeído tamponado a 10%, pois produz menos ligações cruzadas.

Banho-maria e micro-ondas não representam métodos de recuperação antigênica pelo método físico-químico por calor.

As soluções de tampão fosfato (PBS) ou tampão tris (TBS) podem ser também utilizadas para recobrir os cortes entre as passagens de um passo para outro.

Qualquer coloração que não é resultado da reação antígeno/anticorpo é denominada de coloração de fundo específica.