A determinação quantitativa de substâncias em amostras biológicas por métodos de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas inclui a construção e avaliação de curvas de calibração, utilizando-se a mesma matriz proposta para o estudo, adicionadas da substância alvo a analisar, em diferentes concentrações, acrescidas de uma concentração fixa do padrão interno. Observe as afirmativas a seguir, em relação à curva de calibração:
I – caso a variância do erro não seja constante em toda a faixa de quantificação do método analítico, deve ser utilizado o método dos mínimos quadrados ponderados, usando a ponderação que apresentar o menor valor para soma dos erros relativos dos valores nominais dos padrões de calibração versus seus valores obtidos pela equação da curva.
II – somente o modelo linear pode ser usado para a construção da equação matemática que descreve a curva de calibração.
III – um modelo não linear pode ser empregado para a construção da equação da curva de calibração, desde que seja demonstrado matematicamente que o modelo linear não é adequado.
Sobre as afirmativas acima, pode-se dizer que apenas:

A figura abaixo apresenta cromatogramas de íons extraídos provenientes do uso de padrões internos (IS, do inglês internal standard) adicionados à amostra biológica objeto de análise antes do preparo da amostra, a fim de efetuar a análise quantitativa do analito alvo (A) por cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas sequencial. Pode-se dizer que nos casos (a), (b) e (c), o padrão interno usado, respectivamente, é uma substância:

Cromatogramas de íons extraídos apresentando um padrão interno (IS) e um analito alvo (A). Fonte: Lavagnini et al. Quantitative Applications of Mass Spectrometry. John Wiley & Sons Ltd, Chichester, England, 2006.

A Resolução Anvisa RDC n° 27, de 17 de maio de 2012 dispõe sobre requisitos mínimos para a validação de métodos bioanalíticos empregados em estudos com fins de registro e pós-registro de medicamentos. A validação do método para a determinação quantitativa de analitos em matrizes biológicas inclui a construção e avaliação de no mínimo três curvas de calibração com diferentes concentrações do padrão do analito adicionados de padrão interno (PI). Para métodos de cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas, deve ser utilizado, preferencialmente, PI marcado com isótopo estável. Observe as afirmativas a seguir, em relação aos requisitos para PI deuterados:
I – pelo menos 5 átomos de deutério (²H) devem estar presentes na molécula do PI deuterado, a fim de levar a uma diferença de massa de 10 unidades em relação ao analito alvo.

II – os átomos de deutério (²H) devem estar localizados em posições bem definidas da molécula, sem modificação da esteroquímica da molécula.
III – os átomos de deutério (²H) devem estar inseridos em posições estáveis na molécula, sem a possibilidade de troca com átomos de hidrogênio (¹H) durante o uso e armazenamento do PI.
Sobre as afirmativas acima, pode-se dizer que:

O desenvolvimento de métodos inovadores de microextração vem ganhando destaque, considerando que o preparo de amostras biológicas ainda é uma etapa crucial para a obtenção de métodos robustos e confiáveis para análise por cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas. Entre as técnicas de microextração usadas em bioanálises, a que emprega uma coluna capilar de sílica fundida tubular aberta com diferentes fases estacionárias é:

A injeção direta de amostras biológicas, matrizes extremamente complexas, em sistemas cromatográficos convencionais não é indicada, e uma etapa de preparação de amostra geralmente é necessária. Entre as técnicas de extração rápidas e simples utilizadas para o preparo de amostras biológicas para análise por cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas (LC-MS), a que se baseia no equilíbrio de sorção do analito presente na amostra com o sorvente, em que a amostra é misturada dinamicamente com o sorvente por meio da aspiração de ar, é conhecida como:

O preparo de amostras biológicas para análise por cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) tem como objetivos os itens abaixo, EXCETO:

A cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas de alta resolução em instrumento híbrido com analisadores de massa quadrupolo e por tempo de voo (LC-Q-TOF HRMS) foi utilizada por Chakkar et al (2024) para a identificação e a caracterização de produtos de degradação do enasidenib (ver fi gura abaixo), Ingrediente Farmacêutico Ativo (IFA) de um medicamento aprovado em 2017 pela Agência Americana para Medicamentos e Alimentos (U.S. Food and Drug Administration, FDA), para terapia dirigida em pacientes com leucemia mieloide aguda recidivante ou refratária. Além disso, a avaliação de risco de N-nitrosaminas, prováveis agentes carcinógenos para humanos, segundo a Agência Internacional de Pesquisa sobre o Câncer (IARC), foi realizada usando um ensaio de nitrosação modificado (NAP). (CHAKKAR et al. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2024;38:e9696)


Fórmula estrutural do enasidenib. Fonte: Chakkar et al. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2024;38:e9696.
Com base na estrutura apresentada e nas massas atômicas dos isótopos mais abundantes C=12,00000 u, N=14,00307 u, O=15,99491 u, H=1,007825 u, F=18,99840 u, Na=22,98977 u e K=38,96371 u, é INCORRETO afirmar que:

Analisadores de massas de espectrômetros de massas podem ser classificados em dois grupos, de baixa e de alta resolução. Estabeleça a correta correspondência entre as colunas I e II:
Coluna I – resolução
1. alta 2. baixa
Coluna II – analisador
( ) OrbitrapTM
( ) armadilha de íons
( ) quadrupolo
( ) ressonância ciclotrônica de íons
A sequência correta, de cima para baixo, é:

Em relação às vantagens da técnica de espectrometria de massas de alta resolução em relação à espectrometria de massas com analisadores do tipo triplo quadrupolo, é INCORRETO afirmar que:

O efeito matriz é considerado o calcanhar de Aquiles na análise quantitativa em métodos analíticos para farmacocinética, empregando a técnica de cromatografi a líquida de alta ou ultra-eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial com analisadores do tipo triplo quadrupolo. Sobre os efeitos matriz, é INCORRETO afi rmar que: