A técnica de imunofluorescência (IF) geralmente é utilizada para confirmação sorológica nos casos em que as reações antígeno – anticorpo podem ser observadas a partir da utilização de um fluorocromo conjugado às regiões da fração cristalizável (Fc) de uma molécula de anticorpo. Os complexos imunes contendo estes anticorpos marcados podem ser detectados pela emissão de luz fluorescente, quando excitadas por um feixe de menor comprimento de onda, que pode ser vista com o auxílio de um microscópio de fluorescncia após imobilização do material em lâminas.

Sobre este tema observe as afirmativas a seguir:

I - A técnica de imunofluorescência pode ser realizada em uma variedade de materiais clínicos, sempre que houver a presença de células que potencialmente possam estar infectadas com o vírus ou parasita de interesse.

II - Os materiais mais comumente utilizados para IF são: células de cultivo (após a inoculação com o material suspeito), tecidos de  necropsia ou biópsia (impressão direta de tecido na lâmina-clap), tecidos congelados e cortados no criostato (tecidos fixados em formol e incluí dos em parafina), células sanguíneas (leucó citos) e células presentes em secreções (nasais, prepuciais, vaginais, e no leite).

III - Na IF indireta, geralmente utiliza-se anticorpo policlonal, ou anticorpos monoclonais marcados com fluoresceína para detecção de antígenos. A IF indireta tem como vantagens a rapidez e simplicidade, por exemplo, em alguns protocolos o resultado é obtido em menos de uma hora.

IV - Na IF direta o material a ser analisado é fixado em lâminas de microscópio. As células (portadoras de antígenos) são incubadas com o soro que se deseja testar, sendo então tratadas com outro soro que contenha anticorpos específicos para imunoglobulina humana (anti-Ig) conjugada a um fluorocromo, como a fluoresceína. A presença de anticorpos é revelada por meio de microscopia de fluorescência.

Das afirmativas acima, apenas:

Os imunoensaios multiplex baseados em microesferas permitem a medição de múltiplos analitos em um pequeno volume de amostra em um único poço, otimizando a detecção e quantificação de múltiplos biomarcadores em comparação com imunoensaios como o ELISA.O componente que permite a identificação do analito que está sendo avaliado pelo sistema de leitura é:

Os testes rápidos ou PoCT (point-of-care tests) são testes para diagnósticos in vitro realizados de forma rápida, com baixa complexidade e, ainda, de fácil interpretação para uso em triagem, diagnóstico e monitoramento de pacientes. O exemplo mais básico de PoCT é o uso de tiras de teste, como as de urina, que são matrizes porosas secas com elementos de transporte impregnados que interagem com os analitos quando expostos. No caso de PoCT que utilizam anticorpos, das afirmativas abaixo, a que apresenta uma característica INCORRETA é:

A eletroquimiluminescência (ECL) é uma técnica que une reações eletroquímicas e luminescência, transformando energia elétrica em luz. Diferentemente da quimiluminescência, na ECL, as espécies reativas responsáveis pela reação quimiluminescente são geradas eletroquimicamente a partir de precursores estáveis na superİcie de um eletrodo. Sobre este assunto, é correto afirmar que:

Os ensaios ELISA são realizados em placas de poliestireno, tipicamente em placas de 96 poços revestidas para ligação forte de proteínas. Dependendo do tipo de ELISA, o teste requer um anticorpo de detecção primário e/ou secundário, analito/antígeno, anticorpo/antígeno de revestimento, tampão de lavagem e substrato/cromógeno. O anticorpo de detecção primário é um anticorpo específico que se liga apenas à proteína de interesse. Já o anticorpo de detecção secundário é um segundo anticorpo conjugado com enzima que se liga a um anticorpo primário não conjugado com enzima.
Nesse contexto, existem quatro etapas principais para a realização de um ensaio imunológico. É correto afirmar que NÃO faz parte de imunoensaios:

Nas últimas décadas, a automação se tornou fundamental na medicina laboratorial, melhorando a eficiência e sustentabilidade dos laboratórios clínicos. Ela é aplicada em todas as fases do processo laboratorial, desde a preparação até a análise e pós-análise das amostras. A escolha do modelo de automação deve levar em conta o tipo de negócio, considerando aspectos como os exames realizados, o volume de trabalho, as estratégias e a capacidade de investimento. É importante, exclusivamente, para a fase pós-analítica:

Um técnico da sua equipe realizou um exame de citometria para a quantificação de células TCD4+ e TCD8+ com o objetivo de acompanhamento de um paciente HIV. Seu médico solicitou em paralelo um hemograma completo com os resultados abaixo das contagens leucocitárias:

Leucócitos: 7.820/uL
Linfócitos: 50,4%
Neutrófilos: 43,0%
Eosinófilos: 0,9%
Basófi los: 0%
Monócitos: 5,7%

Os resultados encontrados pelo seu técnico na citometria utilizando uma análise de células com uma região na população linfocitária foram:
CD3: 60,3%
CD4: 35,0%
CD8: 25,3%
CD19: 15,0%
CD56: 10,0%

O único resultado correto tanto nos valores quanto no contexto clínico a ser informado sobre o status da infecção desse paciente é:

Durante a epidemia de Zika em 2015, o diagnóstico sorológico apresentou desafios significativos, especialmente em gestantes, um grupo de risco devido ao potencial de transmissão vertical e o desenvolvimento de microcefalia nos fetos. A dificuldade era devido à incapacidade de diferenciação entre o Zika e outros flavivírus, como a dengue, pelo alto grau de homologia entre as proteínas virais. Os testes sorológicos desenvolvidos apresentavam uma sensibilidade adequada, mas a especificidade não era ideal. Nesse contexto, a Neutralização por Redução de Placas (PRNT) surgiu como uma alternativa promissora, que poderia ter melhorado significativamente a capacidade de diagnóstico durante a epidemia, auxiliando na prevenção e tratamento adequados para as gestantes afetadas. Abaixo estão listadas as razões pelas quais o teste de PRNT para Zika não foi implantado na rede diagnóstica de laboratórios clínicos. Avalie se são verdadeiras (V) ou falsas (F) as afirmativas a seguir:

I. O PRNT não apresenta especificidade adequada.
II. A técnica é laboriosa e demora em média 1 semana para o resultado.
III. O Zika vírus é um agente de risco biológico da classe 3.
IV. Não necessita de partículas virais infectantes.

As afirmativas I, II, III e IV são respectivamente:

Conforme a RDC Nº 343, de 13 de dezembro de 2002, é obrigatória a realização de exames laboratoriais de alta sensibilidade em todas as doações de sangue para identificar doenças transmissíveis. Os exames devem ser realizados em amostras coletadas no dia da doação, utilizando kits diagnósticos registrados na ANVISA, em laboratórios especializados. É proibida a realização de exames em “pool” em amostras de sangue, mas essa proibição pode ser reconsiderada se surgirem novas tecnologias aprovadas pela ANVISA. Nesse contexto, todas as bolsas doadas são triadas com um algoritmo de testagem para as doenças abaixo, EXCETO:

Os anticorpos, as primeiras proteínas caracterizadas no reconhecimento imune específico, possuem duas funções: ligação específica a patógenos e recrutamento de células e moléculas para destruí-los. A molécula de anticorpo é estruturalmente dividida em região variável (V), que reconhece antígenos, e região constante (C), envolvida em funções efetoras. Indique a alternativa que completa a frase de forma correta: “A variabilidade das regiões V permite o reconhecimento de uma ampla gama de antígenos, enquanto as regiões C quando”: